TWIST建庫（104206/07）
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增強(qiáng)型酶切片段化
Twist 文庫制備酶切片段化 (EF) 試劑盒 2.0 旨在幫助您更高效地開展測序流程，獲得更準(zhǔn)確的新一代測序 (NGS) 結(jié)果。與原 Twist 文庫制備 EF 試劑盒 1.0 相比，此次更新的試劑盒具有多種優(yōu)勢。除新的片段化和連接模塊外，升級后的試劑盒現(xiàn)在還包括 Equinox 文庫制備擴(kuò)增預(yù)混液。這種熱啟動酶制劑在低輸入體積下錯誤率更低*，且效率更高，因此非常適合 FFPE 等需要高效率和高產(chǎn)量的樣本。
該試劑盒簡化的工作流程將文庫制備步驟合并為一個單管反應(yīng)，再加上低嵌合體率和 Twist 高度均一的靶向富集工作流程，確保您實現(xiàn)更高質(zhì)量的文庫制備，獲得更可靠的測序結(jié)果。
文庫制備工作流程
Twist 文庫制備 EF 試劑盒 2.0 包含進(jìn)行末端修復(fù)、dA 加尾、接頭連接和文庫擴(kuò)增所需的試劑。試劑盒還包含 gDNA 樣本片段化所需的酶，可以用于調(diào)節(jié)插入片段大小。構(gòu)建核心文庫之后，可使用全長或通用接頭來滿足您的應(yīng)用需求。
主要優(yōu)勢
簡化您的工作流程
? DNA 樣本起始量靈活：1 ng– 500 ng
? 3 小時即可將 DNA 樣本轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的擴(kuò)增文庫
? 單管式文庫制備操作，提高效率，獲得一致結(jié)果
穩(wěn)定、高產(chǎn)量擴(kuò)增
? 熱啟動酶制劑，在樣本起始量較低時實現(xiàn)高效產(chǎn)出
? 文庫制備過程中 GC 含量耐受性范圍高 (20%–80%)
? 與常用的聚合酶相比，錯誤率更低
高均一性，低嵌合率
? 搭配 Twist 靶向富集工作流程，實現(xiàn)高度均一的擴(kuò)增
? 更可靠地檢測實際存在的嵌合體
? 能從高度復(fù)雜的文庫中獲得一致的產(chǎn)出，具有良好的靈敏度和特異性
保持中靶率
Twist 文庫制備 EF 試劑盒 2.0 的中靶率與 Twist 文庫制備 EF 試劑盒 1.0 的中靶率相當(dāng)。這里比較了不同雜交條件下的中靶片段比例。
靶向富集使用 Twist 核心外顯子組組合和 Twist 通用接頭系統(tǒng)進(jìn)行。測序使用 NextSeq? 550 或 2000 平臺完成。將數(shù)據(jù)降至 150x 的靶向覆蓋深度，并使用 Picard Metrics 進(jìn)行分析。誤差線表示重復(fù)樣本間的標(biāo)準(zhǔn)差。
降低嵌合率，減少測序錯誤
在文庫制備過程中，盡可能減少不合適的 DNA 連接或重組可以將嵌合體導(dǎo)致的測序錯誤降至**。如圖所示，與 Twist 文庫制備 EF 試劑盒 1.0 相比，升級版 Twist 文庫制備 EF 試劑盒 2.0 可顯著降低嵌合測序片段比例。且其文庫制備的嵌合率與機(jī)械片段化相近。
NGS 文庫通過 Twist 酶切片段化文庫制備試劑盒 1.0、Twist 酶切片段化文庫制備試劑盒 2.0 或 Twist 機(jī)械片段化文庫制備試劑盒生成。靶向富集使用 Twist 核心外顯子組組合和 Twist 通用接頭系統(tǒng)進(jìn)行。使用 NextSeq? 2000 平臺完成測序。將數(shù)據(jù)降至 150x 的靶向覆蓋深度，并展示 Picard Metrics PCT_CHIMERAS 數(shù)據(jù)。誤差線表示重復(fù)樣本間的標(biāo)準(zhǔn)差。
始終如一的性能
可重復(fù)的性能確保了結(jié)果的可靠性。當(dāng)實驗條件保持不變時，Twist 文庫制備 EF 試劑盒 2.0 可產(chǎn)生穩(wěn)定、一致的 DNA 文庫片段大小。如圖所示為使用此試劑盒生成的 8 個不同 NGS 文庫的電泳圖。熒光曲線的重疊顯示文庫制備具有一致性，可以在運行之間實現(xiàn)。
NGS 文庫使用 Twist 文庫制備 EF 試劑盒 2.0 和 Twist 通用接頭系統(tǒng)制備而成。在 37°C 下，對 50 ng 高質(zhì)量 gDNA 進(jìn)行片段化處理，持續(xù) 20 分鐘，再進(jìn)行 6 個PCR循環(huán)擴(kuò)增。使用 Agilent DNA 7500 檢測方法分析樣本，使用 Expert 2100 軟件分析結(jié)果。
調(diào)整片段大小，滿足您的實驗需求
使用 Twist 文庫制備 EF 試劑盒 2.0，僅需調(diào)整片段化時間，即可根據(jù)您的具體需求調(diào)節(jié) DNA 文庫片段大小。如圖所示是采用不同的片段化時間獲得的 4 個 NGS 文庫的電泳圖。
NGS 文庫使用 Twist 文庫制備 EF 試劑盒 2.0 和 Twist 通用接頭系統(tǒng)制備而成。在 37°C 下，按照不同的時長對 50 ng 高質(zhì)量 gDNA 進(jìn)行片段化處理，再進(jìn)行 6 個 PCR 循環(huán)擴(kuò)增。使用 Agilent DNA 7500 檢測方法分析樣本，使用 Expert 2100 軟件分析結(jié)果。
優(yōu)化文庫擴(kuò)增，盡可能減少測序錯誤
擴(kuò)增期間產(chǎn)生錯誤不可避免，但錯誤并非時常出現(xiàn)。升級版 Twist 文庫制備 EF 試劑盒 2.0 包含 Equinox 反應(yīng)預(yù)混液，其中含有高保真的熱啟動酶。與之前推薦和常用的聚合酶相比，Equinox 反應(yīng)預(yù)混液的錯誤率更低，錯誤插入的堿基更少。這意味著它能實現(xiàn)更精準(zhǔn)的擴(kuò)增，從而獲得值得信賴的測序數(shù)據(jù)。
采用專有的 NGS 分析方法來檢測大量錯配堿基對中的堿基錯配事件。給出的數(shù)值代表所有錯配事件的平均錯誤率。
